Клеточные основы радиочастотной 448кГц терапии при выпадении волос

Ключевые слова

Рост волос; Уход за волосами; Культура клеток; Радиочастотная терапия

Введение

Снижение плотности капилляров (DCD) может быть результатом различной этиологии, которая изменяет нормальный характер роста волос, который состоит из следующих фаз, продолжительность которых варьирует в зависимости от области кожи головы: активная фаза формирования волоса (анаген), фаза массивного апоптоза (катаген), фаза покоя (телоген), за которой следует фаза выпадения волос (экзоген) и период пустоты фолликула до образования нового фолликула (кеноген) [1]. У женщин наиболее частой причиной DCD или облысения по женскому типу (FPHL) является андрогенная алопеция по женскому типу (FPAA), которая характеризуется увеличением частоты и продолжительности кеногенной фазы [2]. Это состояние, которым страдают примерно 40–50 % женщин на протяжении всей жизни, с возрастом увеличивается, начинается с выпадения волос на уровне лобной и межтеменной срединной линии и должно быть связано с увеличением активности фермента 5альфа-редуктазы, которая переводит тестостерон в дегидротестостерон.

Варианты лечения DCD разнообразны, включая применение лекарств и пищевых добавок, а также использование микроигл для стимуляции заживления и роста фолликулов, лечение стволовыми клетками, операции по пересадке волос или физиотерапия [4]. Среди фармакологических методов лечения были опробованы антагонисты рецепторов андрогенов (спиронолактон и ципротерона ацетат), ингибиторы 5α-редуктазы (финастерид), антигипертензивные сосудорасширяющие средства (миноксидил) или, в последнее время, обогащенная тромбоцитами плазма [5,6]. Однако в настоящее время только миноксидил одобрен FDA для лечения андрогенной алопеции у женщин [7]. Хотя это лечение уменьшает выпадение волос, оно не способно увеличить количество волосяных фолликулов (HF), что вынуждает пациентов проходить длительные курсы, которые, кроме того, могут вызывать значительные побочные эффекты, такие как сексуальная дисфункция, гипертрихоз и аномалии эмбрионального развития [8]. К физиотерапии относится низкоинтенсивное лазерное излучение (НИЛИ) и фракционные лазеры, общий недостаток которых заключается в том, что они не применимы ко всем типам кожи. Технология НИЛИ использует нетепловой эффект красного и инфракрасного света для фотостимуляции. Хотя механизм его действия еще не установлен, считается, что НИЛИ стимулирует повторное вхождение телогеновых волосяных фолликулов в анаген и продлевает продолжительность этой фазы, что приводит к увеличению плотности и диаметра волос [3]. Знания об эффективности фракционного лазерного излучения все еще ограничены, однако было высказано предположение, что вызванные нагреванием микроскопические поражения, в процессе заживления будут стимулировать рост волос [9]. В целом, лазерная терапия не вызывает серьезных побочных эффектов, поэтому существует консенсус относительно ее потенциальной применимости для лечения CDC и безопасности при правильном использовании. Тем не менее, текущий дефицит двойных слепых клинических исследований без конфликта интересов еще не позволяет надежно определить истинную эффективность этого типа терапии выпадения волос [3,7].

Материал и методы

Клиническое исследование

Включение пациентов и критерии включения/исключения

Исследовательская группа состояла из 25 женщин-добровольцев, которые были набраны из пациентов с диагнозом DCD, которые посещали клинику Elite Laser (Мадрид, Испания) и лазерное отделение больницы Vithas Aravaca (Мадрид, Испания). Эти пациенты имели фототип кожи 2-4 по классификации Фитцпатрика и были в возрасте от 30 до 50 лет. У всех добровольцев было выявлено истончение волос в лобной и медиальной межтеменной области, расположенной за первой линией роста волос: 1-я степень андрогенной алопеции по классификации Людвига [30,31]. Анализ их гормонального профиля не выявил изменений, а цифровая трихоскопия не выявила заболеваний, вызывающих алопецию. Из исследования исключались женщины в период менопаузы, а также те, кто заявлял об активном выпадении волос в течение последних 12 месяцев до постановки диагноза.

Оборудование для радиочастотного воздействия

Неинвазивная электротермическая стимуляция осуществляется путем воздействия на целевые области радиочастотными токами, которые начинаются от активного электрода, приложенного к коже головы, и достигают самоклеящейся прямоугольной пластины обратного электрода с площадью поверхности 132 см 2 (мод. F7805P ^, FIAB , Виккио, Италия), который помещают в межлопаточную область, когда пациентка находится в положении лежа на спине, или на уровне живота, когда она находится в положении лежа. Было использовано емкостное монополярное радиочастотное оборудование Indiba (INDIBA, C/  Moianés, 13, Pol.Ind. Casablanques, 08192 Sant Quirze del Vallés, Barcelona, Spain), которое генерирует электрический ток синусоидальной формы с частотой 448 кГц и плотностью от 115 до 125 мкА/мм ², который вызывал в обработанных участках кожи головы умеренное повышение температуры. Приложенная энергия во время сеансов находилась в диапазоне 5-7 субъективной 11-балльной аналоговой шкалы, которую участники использовали для самоотчета о тепловом восприятии (0, нет теплового ощущения; 10, наивысшая возможная термическая чувствительность) в соответствии с инструкциями по технике безопасности, рекомендованными производителем [32]. В зависимости от поверхности обрабатываемой области использовались различные изогнутые активные электроды в емкостном режиме. В шейной и лобно-теменной областях использовали электрод площадью 1750 мм ^{2 (мод. ELE0148; INDIBA, SAU, Барселона, Испания).} В остальных областях использовали электроды площадью 600 мм ² и 1652 мм ^{2 (мод. ELE0147 и ELE0154 соответственно).}

Оценка индивидуальной реакции на лечение

Чтобы оценить степень индивидуального ответа в четырех обработанных областях, были выбраны четыре основных параметра для оценки уплотняющего эффекта лечения: количество волосяных фолликулов, кумулятивная толщина, количество фолликулярных единиц и тройных фолликулярных единиц, и для каждого пациента и параметра, было решено, что значение после обработки, превышающее 10 % от значения до обработки, является благоприятным эффектом. Это значение является произвольным порогом, принятым на основе анализа средних результатов эффективности, который показал статистически значимые благоприятные эффекты для среднего увеличения <10 % по сравнению со значениями до лечения по нескольким анализируемым параметрам.

Анкета удовлетворенности

После пятого и десятого лечебных сеансов, а также при осмотре, проведенном через 3 месяца после последнего сеанса, пациенты ответили на анкету удовлетворенности из четырех вопросов об их восприятии улучшения с точки зрения мягкости, выпадения, качества и объема волос.

Статистический анализ

Для расчета размера выборки использовались данные о размерах, ранее использовавшиеся для других подобных исследований [21,22,24].

Чтобы оценить влияние лечения на уплотнение волос, изменение каждого параметра оценивали с использованием абсолютных значений, а изменение между до и после лечения выражали в процентах изменения.

Процент изменения каждого параметра/переменной рассчитывался для каждого пациента с использованием следующего уравнения:

% изменения = (Значение после обработки – Значение до обработки)/Значение до обработки*100

Для всех переменных была рассчитана описательная статистика. Сравнение результатов до и после лечения проводили с использованием непараметрического критерия Уилкоксона для парных выборок (рекомендуется для сравнения небольших размеров выборки), а также рассчитывали среднюю разницу между оценками после и до лечения и эффект d-размера Коэна.

Что касается оценки мягкости волос, их выпадения, качества и объема волос, сообщается частота ответов, сообщающих о восприятии улучшения, а также изменение во времени, проверенное с использованием теста Q Cochran.

Предел статистической значимости был определен как 0,05. Тем не менее, были также указаны статистически значимые результаты с применением поправки Бонферрони для нескольких тестов, проведенных для каждого региона (для каждого региона было проведено 11 статистических исследований, что дало предел значимости α = 0,0045). Все анализы проводились с помощью программного обеспечения Jamovi V.1.8.4 (проект Jamovi, 2021 г.) или с помощью SPSS V. 22.0 (выпуск IBM Corp., 2013 г.).

Линейный регрессионный анализ был применен для моделирования взаимосвязи между индивидуальной реакцией на лечение и возрастом пациента с использованием программного обеспечения GraphPad Prism 6.01 (GraphPad Software, Сан-Диего, Калифорния, США).

Иммунофлуоресценция на маркер пролиферации Ki67

Иммунофлуоресцентный анализ на Ki67 проводили на клетках, выращенных на покровных стеклах. В конце 48-часовой обработки клетки фиксировали 4% параформальдегидом и пермеабилизировали смесью 95/5 этанол/уксусная кислота. Клетки инкубировали в течение ночи с моноклональным первичным антителом анти-Ki67 [SP6] (1:250, кат. № ab16667; Abcam; Кембридж, Великобритания) при 4 oC. Затем добавляли вторичное антитело Alexa Fluor® 488 козьего антикроличьего IgG (1:500; кат. № A11034; Life Technologies, Орегон, США) и образцы инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа. Препараты контрастировали и заливали в Prolong ^TM.Золотой антифейдерный реагент с DAPI (кат. № P36941; Thermo-Fisher, Орегон, США) и исследовали в инвертированном флуоресцентном микроскопе (Nikon Eclipse Ц2Р, Япония), подключенном к цифровой камере DS-Ri2 (Nikon, Япония). В каждом повторении эксперимента фотографировали и анализировали пятнадцать полей микроскопа на покровное стекло. Были записаны изображения из три повтора эксперимента, и клетки Ki67+ и общее количество клеток были подсчитаны с помощью программного обеспечения для изображений NIS-Elements Br (версия 4.40, Nikon, Япония). Идентификация клеток Ki67+ основывалась на фиксированных порогах флуоресценции, определенных и автоматизированных в начале анализа.

Иммуноблот для экспрессии ERK1/2, p-ERK1/2, циклина D1 и GAPDH

В конце каждого эксперимента образцы клеток центрифугировали и лизировали в лизирующем буфере: 10 мМ Tris HCl (Merck; Дармштадт, Германия), pH 7,6, 10 мМ KCl (Merk), 1 мМ дитиотреитола (Sigma), 1 мМ ЭДТА (Bio-Rad, Richmond CA), 1 мМ PMSF (Sigma), 10 мкг/мл лейпептина (Sigma), 5 мкг/мл пепстатина (Sigma), 100 мМ NaF (Sigma), 20 мМ β-глицерофосфата (Calbiochem, Калифорния, США), 20 мМ молибдата натрия (Sigma), 0,5 % Triton x100 (ICN Biomedical, Германия) и 0,1 % SDS (Bio-Rad). Белок количественно определяли с использованием анализа белка Pierce BCA (Thermo Fisher Scientific, Рокфорд, Иллинойс, США). Образцы белка (аликвоты белка по 50-60 мкг) разделяли в 10 % полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия и электрофоретически переносили на нитроцеллюлозные мембраны (Amersham, Buckinghamshire, UK) с использованием полусухой системы (Semi-Dryblotting, TRANSBLOT-SD; Bio -Рад).

Блоты инкубировали при 4°C в течение ночи в присутствии мышиных моноклональных первичных антител Cyclin D1 (1:1000, № по кат. P2D11F11; Новокастра, Ньюкасл, Великобритания), кроличьих поликлональных первичных антител ERK1/2 (1:1000; номер по каталогу 9102S, Thermo Fisher Scientific) и кроличьих поликлональных первичных антител p-ERK1/2 (1:1000; номер по каталогу 44-680G, Thermo Fisher Scientific). Моноклональный мышиный анти-GAPDH (1:1000; sc-47724, Santa Cruz Biotechnology, Даллас, Техас, США) использовали в качестве контроля загрузки. Для обнаружения нефосфорилированных форм ERK1/2 мембраны удаляли 25 мМ глицином при рН 2,0 в течение 30 минут. Белок выявляли с использованием вторичных антител, конъюгированных с пероксидазой (ECL ослиные антикроличьи, кат. № NA934; или овечьи антимышиные, кат. № NA931; IgG, связанные с пероксидазой хрена, видоспецифические цельные антитела; GE Healthcare). Для обнаружения ECL-хемилюминесценции в блотах использовали систему ChemiDoc Imaging (Bio-Rad), а изображения анализировали с помощью программы QuantityOne (версия 4.6.7, BioRad). В каждом эксперименте на одну обработку использовали четыре чашки Петри. По крайней мере четыре повторения каждого эксперимента были выполнены на белок и время воздействия.

Влияние на параметры, связанные с количеством и морфологией волосяных фолликулов

Данные, обобщенные на рис. 3B, показывают, что лечение вызывало значительное увеличение количества фолликулярных единиц, присутствующих в областях DCD. В этих областях было зарегистрировано значительное увеличение процентного содержания тройных фолликулярных единиц, сопровождающееся уменьшением одиночных и двойных фолликулярных единиц. Тот же эффект наблюдался в затылочной области без DCD, но не в макушке. Лечение не вызывало значительных изменений количества фолликулярных единиц ни в одной из двух областей без DCD.

Оценка индивидуальной реакции в четырех обработанных областях

Данные на рис. 4 показывают количество пациентов из общей выборки (n = 20), которые продемонстрировали благоприятный ответ в различных обработанных областях (значения после лечения более чем на 10 % по сравнению с соответствующими значениями до лечения) в четыре основных параметра уплотнения волос: среднее количество волос, кумулятивная толщина волос, количество фолликулярных единиц и количество тройных фолликулярных единиц. Что касается среднего количества волос, результаты показывают, что индивидуальный ответ на лечение был более выражен в лобной и височной областях DCD, в которых у 15 и 14 пациентов соответственно наблюдалось увеличение этого параметра более чем на 10%, в то время как в целом у пациентов с повышенным количеством волос было меньше в затылочной области (11 пациентов) и на макушке (6 пациентов). Также было больше пациентов с увеличением более чем на 10 % числа фолликулярных объединений в лобной и височной областях (10 и 8 соответственно), чем в затылочной области и темени (4 и 5 пациентов соответственно). Однако не было заметных различий между четырьмя обработанными областями по количеству пациентов с увеличением кумулятивной толщины волос (9-12 пациентов) и тройных фолликулярных объединений (10-15 пациентов).

В совокупности результаты анализа индивидуальных ответов показывают, что у большинства пациентов наблюдались благоприятные эффекты в нескольких областях лечения. Фактически, при повторном рассмотрении 4 выбранных параметров и поддержании критерия различия более чем на 10 % по сравнению со значениями до лечения было обнаружено, что у всех пациентов отмечалось некоторое улучшение одного или нескольких параметров по крайней мере в двух обработанных областях. , и до 15 из 20 пациентов показали некоторое улучшение в 4 областях (рис. 5).

Рисунок 3:  Влияние на параметры, связанные с количеством и морфологией волос (3A) и волосяных фолликулов (3B). Значения представляют собой средние значения ± SE процентного изменения между до и после лечения в четырех изученных областях. *: р<0,05; **: р<0,01; ***: p<0,001: Критерии Коэна и Вилкоксона с последующей поправкой Бонферрони для множественных тестов.

Рисунок 4:  Количество пациентов (N), которые показали благоприятные эффекты (> 10% от значений до лечения) по одному или нескольким параметрам, рассматриваемым в 4 изученных областях, с алопецией и без алопеции.

Таблица 1: Процент пациентов с положительным восприятием. (*: р<0,05; ***: р<0,001: критерий Коэна и Вилкоксона с последующей поправкой Бонферрони для нескольких тестов).

Влияние электрической стимуляции CRET на культуры клеток дермального сосочка

Влияние на пролиферацию клеток

Анализ XTT показал, что прерывистая электрическая стимуляция в течение 48 часов вызывала значительное увеличение, на 20 ± 7,6%, по сравнению с контрольной группой, подвергшейся ложному воздействию, пролиферации DPC (рис. 7). Этот пролиферативный ответ был подтвержден и усилен результатами иммунофлуоресцентного анализа с маркером пролиферации Ki67, которые показали статистически значимое увеличение (32 ± 8,5 %) по сравнению с контролем количества клеток Ki67+ в группе, подвергнутой электрическому воздействию (рис. 7).

Иммуноблот-анализ белков, участвующих в пролиферации ДПК: p-ERK, ERK и циклин D1

Прерывистая электрическая стимуляция в течение 12 часов вызывала значительное увеличение экспрессии p-ERK1/2 (на 51,5 ± 18,3 % по сравнению с контрольной группой, подвергшейся ложному воздействию). Никаких изменений не наблюдалось при более длительных сроках, когда лечение продолжалось в течение 24 или 48 часов (рис. 8). Что касается нефосфорилированной формы ERK1/2, то ее экспрессия не подвергалась существенному влиянию стимуляции ни в одном из протестированных интервалов. С другой стороны, на экспрессию циклина D1 значительно влияла электростимуляция с помощью CRET во всех изученных интервалах (рис. 9), при этом наблюдалась значительная сверхэкспрессия циклина в конце 12-часового и 24-часового интервалов лечения (23,05 ± 9,3 %). и на 10,3 ± 2,8 % выше соответствующего контроля соответственно) и субэкспрессии через 48 ч воздействия (на 11,5 ± 5,0 % ниже контроля).

Рисунок 8:  Иммуноблот для p-ERK1/2 и ERK1/2. А. Анализ экспрессии p-ERK1/2 и ERK1/2. Образцы обрабатывали CRET (прерывистое воздействие 4 часа) в течение 12, 24 или 48 часов. Данные, нормализованные по контрольным группам, получавшим ложную обработку, представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего отношения p-ERK1/2 к общему белку ERK1/2 по меньшей мере в 5 экспериментальных повторах за интервал обработки. *Р<0,05; t-критерий Стьюдента. B. Репрезентативные иммуноблоты с использованием GAPDH в качестве контроля загрузки.

Рисунок 9:  Иммуноблот для циклина D1. А. Анализ экспрессии циклина D1. Образцы обрабатывали CRET (прерывистое воздействие 4 часа) в течение 12, 24 или 48 часов. Данные, нормализованные по контрольным группам, получавшим ложную обработку, представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего для не менее 4 экспериментальных повторов за интервал обработки. *Р<0,05; t-критерий Стьюдента. B. Репрезентативные иммуноблоты с использованием GAPDH в качестве контроля загрузки.

В целом эти результаты совокупности эффектов, наблюдаемых в пуле из 20 пациентов, согласуются с результатами анализа индивидуального ответа каждого пациента, обобщенными на рис. 4. Фактически количество пациентов, у которых в конце исследование показало увеличение более чем на 10 % количества волос и фолликулярных объединений в лобной и затылочной областях, что было выше, чем у пациентов, у которых эти эффекты наблюдались в височной области и на макушке. Это может свидетельствовать о большей восприимчивости к электротермической обработке участков, пораженных DCD. С другой стороны, количество пациентов с увеличением кумулятивной толщины волос и частоты тройных фолликулярных единиц было одинаковым в четырех обработанных областях, что подтверждает, что также области с фолликулярной плотностью, считающейся нормальной в соответствии с диагнозом до лечения, могут реагировать на электротермическую стимуляцию. Фактически, комбинация данных об индивидуальной чувствительности (рис. 5) показывает, что у 19 из 20 пациентов наблюдались благоприятные эффекты в 3 или более обработанных областях по крайней мере по одному из четырех рассматриваемых параметров.

Однако анализ индивидуальных ответов также выявил заметные различия между пациентами по уровню ответа на лечение. Действительно, в то время как у некоторых пациентов наблюдались улучшения в нескольких параметрах уплотнения волос и в нескольких обработанных областях, у других пациентов наблюдались улучшения в меньшем количестве параметров и/или в меньшем количестве областей. Анализ записей и историй болезни пациенток не выявил достоверных связей между степенью их реакции на лечение и такими факторами, как возраст (рис. 6), особенности волосяного фолликула, особенности кожи головы, предшествующие беременности и предшествующие заболевания (данные не показаны).

Некоторые из результатов, описанных выше, совпадают с результатами нескольких исследований, в которых применялась радиочастотная электрическая терапия для лечения алопеции. В одном слепом исследовании, проведенном на выборке из 24 мужчин, применение неабляционных радиочастотных токов увеличило рост волос по сравнению с группой, не получавшей лечения [21]. Другое исследование с участием 19 мужчин с диагнозом андрогенная алопеция показало улучшение эффективности комбинированного лечения биполярными радиочастотными токами 1 МГц и миноксидилом по сравнению с лечением только миноксидилом [24]. В исследовании 25 пациенток с андрогенной алопецией лечение фракционными радиочастотными токами привело к улучшению количества и толщины волос, в основном в лобной области, без какого-либо заметного дискомфорта или побочных эффектов [22]. Хотя биологические и физиологические механизмы, участвующие в этих реакциях на RF, еще не определены, было высказано предположение, что воздействие RF может способствовать выработке факторов роста, таких как инсулиноподобный фактор роста 1 (ИФР-1), фактор роста эндотелия сосудов. (VEGF) или фактор роста гепатоцитов (HGF), участвующий в процессах роста волос [37]. Если это так, можно также предположить, что, по крайней мере, часть эффектов уплотнения, наблюдаемых в настоящем исследовании, может быть связана с увеличением производства таких факторов роста из-за стимулирования кровоснабжения, вызванного механическими и тепловыми стимулами, обеспечиваемыми лечением CRET. Фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) или фактор роста гепатоцитов (HGF), участвовали в процессах роста волос [37]. 

Полученные экспериментальные результаты показывают, что по сравнению с соответствующими контрольными группами, подвергшимися ложной обработке, субтермическая радиочастотная электростимуляция с помощью CRET вызывает значительное увеличение экспрессии Ki67, наблюдаемое через 48 часов воздействия, а также экспрессию циклина D1 через 12 и 24 ч, а при фосфорилировании ERK1/2 через 12 ч. Можно предположить, что стимуляция экспрессии циклина D1 и форфорилирования ERK1/2 участвуют в пролиферативном ответе, выявляемом с помощью анализа XTT и мечения Ki67 после 48 ч воздействия. Тот факт, что после 12 ч или 24 ч воздействия не было обнаружено значительных изменений в экспрессии ERK1/2 или циклина D1 соответственно, указывает на то, что пролиферативный эффект, индуцированный CRET, будет иметь место посредством ранней регуляции экспрессии циклина D1, и активации пути MAPK/ERK1/2. Эти результаты, которые согласуются с другими ранее полученными нашей группой данными, свидетельствующими о том, что активация ERK1/2 также участвует в пролиферации кератиноцитов, фибробластов и стволовых клеток человека, индуцированной субтермической электростимуляцией на частоте 448 кГц, дополняют совокупность экспериментальных данных, свидетельствующих о том, что Радиочастотное воздействие может стимулировать рост волос [11,12]. Так, сообщалось, что субтермическое воздействие электромагнитных полей частотой 1,763 МГц может стимулировать экспрессию Ki67 в кератиноцитах матрикса и увеличивать удлинение стержня волоса в культуре волосяных органов ex vivo [44], или что обработка токами от 1 до 2 МГц увеличивает пролиферацию и экспрессию Wnt/b-катенина, Ki67, p-ERK и p-AKT в DPC [45]. 

В совокупности эти данные подтверждают гипотезу о том, что сама по себе электрическая стимуляция вносит значительный вклад в эффект восстановления плотности волос при электротермической обработке CRET. Эффект электрического стимула будет проявляться посредством ранней индукции сверхэкспрессии или активации белков, непосредственно участвующих в контроле клеточного цикла DPC, присутствующих в волосяных фолликулах пациентов с DCD. Аналогичные эффекты ранней гиперэкспрессии белков клеточного цикла были зарегистрированы в фибробластах и ​​кератиноцитах человека, обработанных субтермической электростимуляцией CRET на частоте 448 кГц [12]. Имеются экспериментальные данные, указывающие на то, что клеточный ответ на электрический стимул CRET будет нелинейно зависеть от частоты сигнала [46].

Короче говоря, результаты исследования показывают, что через три месяца после окончания электротермического лечения КРЭТ у пациентов в целом наблюдалось значительное увеличение плотности волос, что было выявлено при анализе трихоскопических данных по производной шкале Синклера. Этот эффект обусловлен значительными изменениями, зарегистрированными в различных параметрах, участвующих в регенерации волос, включая увеличение среднего количества волос и количества фолликулярных единиц. Такие изменения выявлялись как в зонах с дефицитом капиллярной плотности по предпроцедурной диагностике, так и в тех, чья фолликулярная плотность считалась нормальной. Поскольку основным механизмом, лежащим в основе патологического выпадения волос, является нарушение регуляции пролиферации клеток дермального сосочка, пролиферативная реакция DPC на субтермический электрический раздражитель может быть сильно вовлечена в некоторые из эффектов повторного уплотнения, наблюдаемых в трихологическом исследовании. Таким образом, электрическая стимуляция может способствовать росту волос и пролиферации фолликулов, а также индуцировать появление и сохранение волосяных фолликулов в анагене. Этот электроиндуцированный эффект может быть добавлен к эффектам термических и механических стимулов лечения CRET, чей потенциальный вклад в наблюдаемое восстановление плотности волос еще недостаточно охарактеризован или определен количественно.