Клеточные основы радиочастотной 448кГц терапии при выпадении волос

Наранхо Пабло ^1,2* , Мартинес-Паскуаль Мария Антония ³ , Лопес Андрино Родольфо ¹ , Сарса Лусианьес Даниэль ² , Эрнандес-Буле Мария Луиза ³

¹ Элитная лазерная клиника, Мадрид, Испания
² Лазерное отделение, больница Витас Аравака, Мадрид, Испания
³ Servicio de Bioelectromagnetismo, Hospital Universitario Ramon Y Cajal, IRYCIS, Мадрид, Испания

* Автор, ответственный за переписку: Наранхо Пабло, Elite Laser Clinic, Мадрид, Испания, направление: Paseo de las Acacias nº 63, 28005 Мадрид, Испания; Электронная почта: dr.naranjo@elitelaser.es

Дата публикации: 21-06-2022

Copyright© 2022 Пабло Н. и др. Все права защищены. Это статья с открытым доступом, распространяемая в соответствии с лицензией Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование, распространение и воспроизведение на любом носителе при условии указания оригинального автора и источника.

Аннотация

Цель:  Емкостно-резистивная электротермическая терапия (CRET) доказала свою эффективность в регенерации тканей. В этом исследовании анализируется реакция на лечение CRET с частотой 448 кГц у 20 пациентов с выпадением волос по женскому типу (FPHL) и в клетках дермального сосочка (DPC) у женщин.

Методы. Пациенты прошли десять 20-минутных сеансов CRET с интервалом в 8 недель. Через три месяца после последнего сеанса эффект лечения был проанализирован трихоскопически. DPC периодически стимулировали CRET в течение 12, 24 или 48 часов, и анализировали влияние на клеточную пролиферацию и экспрессию нескольких белков, участвующих в клеточной пролиферации.

Результаты: данные трихоскопии выявили генерализованное, статистически значимое уплотнение волос (на 10-15 % по сравнению с показателями до лечения) на всех обработанных участках кожи головы. Электростимуляция in vitro значительно увеличила пролиферацию DPC и экспрессию белков, участвующих в пролиферации клеток. Поскольку нарушение регуляции пролиферации DPC является основным фактором, лежащим в основе аномального выпадения волос, вполне вероятно, что индуцированная электрическим током пролиферация DPC участвует в эффектах увеличения плотности, полученных в трихологическом исследовании.

Вывод: результаты трихологического исследования у пациенток с FPHL и результаты экспериментального исследования у женщин с DPC согласуются друг с другом и позволяют предположить, что 448-кГц CRET может быть эффективным как для восстановления плотности волос, так и для предотвращения их выпадения.

Ключевые слова

Рост волос; Уход за волосами; Культура клеток; Радиочастотная терапия

Введение

Снижение плотности капилляров (DCD) может быть результатом различной этиологии, которая изменяет нормальный характер роста волос, который состоит из следующих фаз, продолжительность которых варьирует в зависимости от области кожи головы: активная фаза формирования волоса (анаген), фаза массивного апоптоза (катаген), фаза покоя (телоген), за которой следует фаза выпадения волос (экзоген) и период пустоты фолликула до образования нового фолликула (кеноген) [1]. У женщин наиболее частой причиной DCD или облысения по женскому типу (FPHL) является андрогенная алопеция по женскому типу (FPAA), которая характеризуется увеличением частоты и продолжительности кеногенной фазы [2]. Это состояние, которым страдают примерно 40–50 % женщин на протяжении всей жизни, с возрастом увеличивается, начинается с выпадения волос на уровне лобной и межтеменной срединной линии и должно быть связано с увеличением активности фермента 5альфа-редуктазы, которая переводит тестостерон в дегидротестостерон.

Варианты лечения DCD разнообразны, включая применение лекарств и пищевых добавок, а также использование микроигл для стимуляции заживления и роста фолликулов, лечение стволовыми клетками, операции по пересадке волос или физиотерапия [4]. Среди фармакологических методов лечения были опробованы антагонисты рецепторов андрогенов (спиронолактон и ципротерона ацетат), ингибиторы 5α-редуктазы (финастерид), антигипертензивные сосудорасширяющие средства (миноксидил) или, в последнее время, обогащенная тромбоцитами плазма [5,6]. Однако в настоящее время только миноксидил одобрен FDA для лечения андрогенной алопеции у женщин [7]. Хотя это лечение уменьшает выпадение волос, оно не способно увеличить количество волосяных фолликулов (HF), что вынуждает пациентов проходить длительные курсы, которые, кроме того, могут вызывать значительные побочные эффекты, такие как сексуальная дисфункция, гипертрихоз и аномалии эмбрионального развития [8]. К физиотерапии относится низкоинтенсивное лазерное излучение (НИЛИ) и фракционные лазеры, общий недостаток которых заключается в том, что они не применимы ко всем типам кожи. Технология НИЛИ использует нетепловой эффект красного и инфракрасного света для фотостимуляции. Хотя механизм его действия еще не установлен, считается, что НИЛИ стимулирует повторное вхождение телогеновых волосяных фолликулов в анаген и продлевает продолжительность этой фазы, что приводит к увеличению плотности и диаметра волос [3]. Знания об эффективности фракционного лазерного излучения все еще ограничены, однако было высказано предположение, что вызванные нагреванием микроскопические поражения, в процессе заживления будут стимулировать рост волос [9]. В целом, лазерная терапия не вызывает серьезных побочных эффектов, поэтому существует консенсус относительно ее потенциальной применимости для лечения CDC и безопасности при правильном использовании. Тем не менее, текущий дефицит двойных слепых клинических исследований без конфликта интересов еще не позволяет надежно определить истинную эффективность этого типа терапии выпадения волос [3,7].

Другой метод физиотерапии для лечения алопеции основан на использовании радиочастот (RF). Это электротермическая терапия, при которой применяются радиочастотные токи, которые из-за сопротивления жировой ткани прохождению тока вызывают повышение температуры ткани с абляцией или без нее. Неабляционные эффекты включают расширение сосудов, активацию клеточной пролиферации, неоангиогенез, неоколлагеногенез или увеличение толщины дермы [10-13]. RF-технологии можно применять к любому типу кожи с помощью неинвазивных или минимально инвазивных процедур и с минимальным риском осложнений или побочных эффектов [14]. RF успешно применяются для эстетических процедур, таких как уменьшение дряблости кожи, коррекция морщин, омоложение кожи лица и тела, работа с фиброзом, рубцами и спайками, коррекция целлюлита, уменьшение локальных жировых отложений и лечение алопеции [15]. 

Емкостно-резистивная электрическая терапия (CRET) представляет собой неинвазивную радиочастотную технологию, в которой применяются токи частотой 448 кГц, и которая успешно используется для регенерации мышечной ткани, костей, а также сухожилий и связок [16-18]. В эстетической медицине было показано, что CRET потенциально эффективен для уменьшения морщин [19,20]. Что касается лечения CDC, существует несколько клинических исследований, проведенных с радиочастотной терапией в целом и с CRET-терапией в частности, что ограничивает знания об эффективности и идеальных условиях для применения этих технологий [21-24]. Однако имеется большое количество доклинических исследований, показывающих, что даже при применении в субтермальном режиме электрический стимул CRET оказывает регенеративное действие, основанное на стимуляции пролиферации и ранней хондрогенной дифференцировки стволовых клеток человека, полученных из жировой ткани, фибробластов и кератиноцитов человека, а также миграции в фибробластах и ​​экспрессии белков теплового шока, и может модулировать адипогенную дифференцировку стволовых клеток человека.  [11,12,25-27]. Взятые вместе, результаты этих исследований убедительно свидетельствуют о том, что электрическая стимуляция может сама по себе вызывать различные типы соответствующих клеточных ответов, потенциально связанных с эффектами электротермической терапии CRET при применении к регенерации различных тканей. 

На основании всего вышеизложенного в настоящем исследовании изучается клиническая эффективность электротермической терапии CRET в уплотнении волос у женщин с диагнозом андрогенная алопеция. Кроме того, учитывая, что пролиферация клеток дермального сосочка (DPC), присутствующих в волосяном фолликуле человека, является фундаментальным явлением для выживания и роста фолликулярной единицы [28,29]. Это исследование также фокусируется на потенциальной значимости электрического компонента лечения путем изучения пролиферативной реакции DPC у женщин европеоидной расы, подвергшихся in vitro воздействию электрического сигнала CRET, применяемого в субтермальном режиме.

Материал и методы

Клиническое исследование

Включение пациентов и критерии включения/исключения

Исследовательская группа состояла из 25 женщин-добровольцев, которые были набраны из пациентов с диагнозом DCD, которые посещали клинику Elite Laser (Мадрид, Испания) и лазерное отделение больницы Vithas Aravaca (Мадрид, Испания). Эти пациенты имели фототип кожи 2-4 по классификации Фитцпатрика и были в возрасте от 30 до 50 лет. У всех добровольцев было выявлено истончение волос в лобной и медиальной межтеменной области, расположенной за первой линией роста волос: 1-я степень андрогенной алопеции по классификации Людвига [30,31]. Анализ их гормонального профиля не выявил изменений, а цифровая трихоскопия не выявила заболеваний, вызывающих алопецию. Из исследования исключались женщины в период менопаузы, а также те, кто заявлял об активном выпадении волос в течение последних 12 месяцев до постановки диагноза.

Оборудование для радиочастотного воздействия

Неинвазивная электротермическая стимуляция осуществляется путем воздействия на целевые области радиочастотными токами, которые начинаются от активного электрода, приложенного к коже головы, и достигают самоклеящейся прямоугольной пластины обратного электрода с площадью поверхности 132 см 2 (мод. F7805P ^, FIAB , Виккио, Италия), который помещают в межлопаточную область, когда пациентка находится в положении лежа на спине, или на уровне живота, когда она находится в положении лежа. Было использовано емкостное монополярное радиочастотное оборудование Indiba (INDIBA, C/  Moianés, 13, Pol.Ind. Casablanques, 08192 Sant Quirze del Vallés, Barcelona, Spain), которое генерирует электрический ток синусоидальной формы с частотой 448 кГц и плотностью от 115 до 125 мкА/мм ², который вызывал в обработанных участках кожи головы умеренное повышение температуры. Приложенная энергия во время сеансов находилась в диапазоне 5-7 субъективной 11-балльной аналоговой шкалы, которую участники использовали для самоотчета о тепловом восприятии (0, нет теплового ощущения; 10, наивысшая возможная термическая чувствительность) в соответствии с инструкциями по технике безопасности, рекомендованными производителем [32]. В зависимости от поверхности обрабатываемой области использовались различные изогнутые активные электроды в емкостном режиме. В шейной и лобно-теменной областях использовали электрод площадью 1750 мм ^{2 (мод. ELE0148; INDIBA, SAU, Барселона, Испания).} В остальных областях использовали электроды площадью 600 мм ² и 1652 мм ^{2 (мод. ELE0147 и ELE0154 соответственно).}

Дизайн исследования

Был применен дизайн проспективного, открытого и нерандомизированного многоцентрового исследования. Все набранные пациенты добровольно прошли клиническое лечение, которое они получили бесплатно после подписания информированного согласия. Чтобы гарантировать постоянство в исследовании, пациенты разместили залог, который был возмещен им после завершения лечения. Все процедуры следовали принципам, описанным в текущей пересмотренной версии Хельсинской декларации, (good clinical practices) надлежащей клинической практике и с соблюдением всех применимых законов Испании и соответствующих нормативных требований в отношении использования медицинских устройств.

Процедуры проводились в соответствии с рекомендациями производителя и с использованием активных электродов площадью от 600 до 1750 мм ² , контактирующих с кожей головы через инертную электропроводящую среду в виде крема (на участках без волос) или лосьона (на участках с волосяным покровом). ). В каждом случае выбор используемого электрода определялся кривизной черепа и поверхностью обрабатываемой области, чтобы был достигнут максимально возможный контакт с кожей головы. Каждый доброволец получил 10 сеансов, из расчета 2 раза в течение первой недели и один раз в неделю в течение следующих 8 недель. Каждая процедура состояла из двух фаз:

• Фаза I, электротермическая предварительная обработка (IAS 5 – 7) шейной (лежа на спине) и лобно-теменной (лежа на животе) областей с целью увеличения кровотока в областях, прилегающих к целевому отделу черепа. После нанесения электропроводящего крема (Proionic Care Cream; INDIBA, SAU, Барселона, Испания) использовался соответствующий активный электрод на 5 минут за сеанс.
• Фаза II, электротермическая обработка (ИАС 6-8) области головы: макушки и затылочной (лежа на животе) и лобной и межтеменной областей (лежа на спине). Воздействие производилось по предварительно нанесенному лосьону для волос (INDIBA, SAU, Барселона, Испания). Продолжительность воздействия 15 минут за сеанс.

Во всех сеансах обе фазы процедуры проводились одним и тем же специалистом. Никакого дополнительного лечения не применялось, и пациенты согласились не использовать травмирующие воздействия для здоровья волос во время исследования.

Общая оценка эффективности

Для оценки эффективности лечения использовалась модель  FotoFinder Trichoscale Pro System, трихоскоп (FotoFinder Systems GmbH, Германия), оснащенный камерой Medicam 1000 (FotoFinder). Всегоу у каждого пациента было сделано 32 цифровых трихоскопических изображения: 16 (по 4 на каждую из 4 изучаемых зон) непосредственно перед первым сеансом и 16 после лечения, 3 месяца после последнего сеанса. Снимки были сделаны по инструкциям производителя трихоскопа и каждое изображение сфотографировало площадь  0,903 см2. Изображения были независимо оценены с помощью программного обеспечения TrichoLAB Suite тремя различными лабораториями (TrichoLAB, Варшава, Польша), которые оценивали следующие параметры: среднее количество волос (кол-во/см2), средняя толщина стержня волоса (мкм), тонкие волосы <30 мкм (%), средние волосы 30-50 мкм (%), толстые волосы > 50 мкм (%), одиночные фолликулярные единицы (%), двойные фолликулярные единицы (%), тройные фолликулярные единицы (%), совокупная толщина волос (мм/см2) и количество фолликулярных единиц (кол-во/см2). Кроме того изучен общий эффект повышения плотности, который оценивается с использованием производной шкалы Синклера – стандартной процедуры классификации степени выпадения волос у женщин, соотносится с шириной пробора в центральной линии [35].

Оценка индивидуальной реакции на лечение

Чтобы оценить степень индивидуального ответа в четырех обработанных областях, были выбраны четыре основных параметра для оценки уплотняющего эффекта лечения: количество волосяных фолликулов, кумулятивная толщина, количество фолликулярных единиц и тройных фолликулярных единиц, и для каждого пациента и параметра, было решено, что значение после обработки, превышающее 10 % от значения до обработки, является благоприятным эффектом. Это значение является произвольным порогом, принятым на основе анализа средних результатов эффективности, который показал статистически значимые благоприятные эффекты для среднего увеличения <10 % по сравнению со значениями до лечения по нескольким анализируемым параметрам.

Анкета удовлетворенности

После пятого и десятого лечебных сеансов, а также при осмотре, проведенном через 3 месяца после последнего сеанса, пациенты ответили на анкету удовлетворенности из четырех вопросов об их восприятии улучшения с точки зрения мягкости, выпадения, качества и объема волос.

Статистический анализ

Для расчета размера выборки использовались данные о размерах, ранее использовавшиеся для других подобных исследований [21,22,24].

Чтобы оценить влияние лечения на уплотнение волос, изменение каждого параметра оценивали с использованием абсолютных значений, а изменение между до и после лечения выражали в процентах изменения.

Процент изменения каждого параметра/переменной рассчитывался для каждого пациента с использованием следующего уравнения:

% изменения = (Значение после обработки – Значение до обработки)/Значение до обработки*100

Для всех переменных была рассчитана описательная статистика. Сравнение результатов до и после лечения проводили с использованием непараметрического критерия Уилкоксона для парных выборок (рекомендуется для сравнения небольших размеров выборки), а также рассчитывали среднюю разницу между оценками после и до лечения и эффект d-размера Коэна.

Что касается оценки мягкости волос, их выпадения, качества и объема волос, сообщается частота ответов, сообщающих о восприятии улучшения, а также изменение во времени, проверенное с использованием теста Q Cochran.

Предел статистической значимости был определен как 0,05. Тем не менее, были также указаны статистически значимые результаты с применением поправки Бонферрони для нескольких тестов, проведенных для каждого региона (для каждого региона было проведено 11 статистических исследований, что дало предел значимости α = 0,0045). Все анализы проводились с помощью программного обеспечения Jamovi V.1.8.4 (проект Jamovi, 2021 г.) или с помощью SPSS V. 22.0 (выпуск IBM Corp., 2013 г.).

Линейный регрессионный анализ был применен для моделирования взаимосвязи между индивидуальной реакцией на лечение и возрастом пациента с использованием программного обеспечения GraphPad Prism 6.01 (GraphPad Software, Сан-Диего, Калифорния, США).

Исследование in-vitro

Культура клеток

Клетки дермального сосочка фолликула человека (HDPC), полученные у (PromoCell, кат. № C-12071, Heidelber, Germany), выделяли из латеральной части дермы скальпа здоровой женщины европеоидной расы без алопеции. Клетки инкубировали в подходящей среде для роста клеток (PromoCell, номер по каталогу C-26501) и поддерживали в атмосфере с 5 % CO ₂ при температуре 37 °C внутри CO _{2 .}инкубатора (Thermo Fisher Scientific, Уолтем, Массачусетс, США). После отделения с помощью Detachkit (PromoCell, кат. № C-41220) клетки пересаживали один раз в неделю и высеивали на дно чашек Петри диаметром 60 мм (Nunc, Roskilde, Дания), за исключением иммунофлуоресцентных анализов, в которых клетки сеяли на покровные стекла, помещенные на дно чашек. В зависимости от цели соответствующего эксперимента на каждую повторность эксперимента высевали от 4 до 10 чашек Петри.

Лечение электрическим током in vitro

Процедура и материалы для лечения емкостно-резистивной электротерапией (CRET) in vitro были описаны в предыдущих исследованиях [11,36]. Вкратце, через 3 или 4 дня после посева, в зависимости от эксперимента, во все чашки Петри вставляли пары стерильных электродов из нержавеющей стали, специально предназначенных для стимуляции in vitro, и соединяли последовательно. Только электроды, соответствующие пластинам, предназначенным для электрической стимуляции, получали питание с помощью генератора сигналов (Indiba HCR 902, INDIBA® ^, Барселона, Испания), приспособленного для подачи синусоидального сигнального тока частотой 448 кГц, идентичного тому, который применяется при проведении процедур пациентам. Оставшиеся, обесточенные пластины одновременно ложно экспонировались в идентичном, отдельном CO ₂инкубаторе. Схема прерывистой стимуляции, состоящая из 5-минутных импульсов тока частотой 448 кГц, подаваемых при субтермической плотности 100 мкА/мм ² , разделенных 235-минутными промежутками между импульсами и проводимых в течение 12 часов, 24 часов или 48 часов. Показано, что такие параметры воздействия стимулируют пролиферацию стволовых клеток, кератиноцитов и фибробластов человека [11,12,25,27].

Анализ пролиферации XTT

Пролиферацию клеток определяли с помощью анализа XTT (Roche, Швейцария). Культуры HFDPC высевали при плотности 5500 клеток/см ² и инкубировали в течение 3 дней. После 48 часов CRET- или ложной обработки клетки инкубировали в течение 3 часов с тетразолиевой солью XTT при температуре 37 ºC и 6,5% CO ₂ в атмосфере, как рекомендовано производителем. Метаболически активные клетки восстанавливали XTT до окрашенных соединений формазана, количество которых определяли с помощью устройства для считывания микропланшетов (TECAN, Маннедорф, Швейцария) при длине волны 492 нм. Этот эксперимент был проведен три раза.

Иммунофлуоресценция на маркер пролиферации Ki67

Иммунофлуоресцентный анализ на Ki67 проводили на клетках, выращенных на покровных стеклах. В конце 48-часовой обработки клетки фиксировали 4% параформальдегидом и пермеабилизировали смесью 95/5 этанол/уксусная кислота. Клетки инкубировали в течение ночи с моноклональным первичным антителом анти-Ki67 [SP6] (1:250, кат. № ab16667; Abcam; Кембридж, Великобритания) при 4 oC. Затем добавляли вторичное антитело Alexa Fluor® 488 козьего антикроличьего IgG (1:500; кат. № A11034; Life Technologies, Орегон, США) и образцы инкубировали при комнатной температуре в течение 1 часа. Препараты контрастировали и заливали в Prolong ^TM.Золотой антифейдерный реагент с DAPI (кат. № P36941; Thermo-Fisher, Орегон, США) и исследовали в инвертированном флуоресцентном микроскопе (Nikon Eclipse Ц2Р, Япония), подключенном к цифровой камере DS-Ri2 (Nikon, Япония). В каждом повторении эксперимента фотографировали и анализировали пятнадцать полей микроскопа на покровное стекло. Были записаны изображения из три повтора эксперимента, и клетки Ki67+ и общее количество клеток были подсчитаны с помощью программного обеспечения для изображений NIS-Elements Br (версия 4.40, Nikon, Япония). Идентификация клеток Ki67+ основывалась на фиксированных порогах флуоресценции, определенных и автоматизированных в начале анализа.

Иммуноблот для экспрессии ERK1/2, p-ERK1/2, циклина D1 и GAPDH

В конце каждого эксперимента образцы клеток центрифугировали и лизировали в лизирующем буфере: 10 мМ Tris HCl (Merck; Дармштадт, Германия), pH 7,6, 10 мМ KCl (Merk), 1 мМ дитиотреитола (Sigma), 1 мМ ЭДТА (Bio-Rad, Richmond CA), 1 мМ PMSF (Sigma), 10 мкг/мл лейпептина (Sigma), 5 мкг/мл пепстатина (Sigma), 100 мМ NaF (Sigma), 20 мМ β-глицерофосфата (Calbiochem, Калифорния, США), 20 мМ молибдата натрия (Sigma), 0,5 % Triton x100 (ICN Biomedical, Германия) и 0,1 % SDS (Bio-Rad). Белок количественно определяли с использованием анализа белка Pierce BCA (Thermo Fisher Scientific, Рокфорд, Иллинойс, США). Образцы белка (аликвоты белка по 50-60 мкг) разделяли в 10 % полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия и электрофоретически переносили на нитроцеллюлозные мембраны (Amersham, Buckinghamshire, UK) с использованием полусухой системы (Semi-Dryblotting, TRANSBLOT-SD; Bio -Рад).

Блоты инкубировали при 4°C в течение ночи в присутствии мышиных моноклональных первичных антител Cyclin D1 (1:1000, № по кат. P2D11F11; Новокастра, Ньюкасл, Великобритания), кроличьих поликлональных первичных антител ERK1/2 (1:1000; номер по каталогу 9102S, Thermo Fisher Scientific) и кроличьих поликлональных первичных антител p-ERK1/2 (1:1000; номер по каталогу 44-680G, Thermo Fisher Scientific). Моноклональный мышиный анти-GAPDH (1:1000; sc-47724, Santa Cruz Biotechnology, Даллас, Техас, США) использовали в качестве контроля загрузки. Для обнаружения нефосфорилированных форм ERK1/2 мембраны удаляли 25 мМ глицином при рН 2,0 в течение 30 минут. Белок выявляли с использованием вторичных антител, конъюгированных с пероксидазой (ECL ослиные антикроличьи, кат. № NA934; или овечьи антимышиные, кат. № NA931; IgG, связанные с пероксидазой хрена, видоспецифические цельные антитела; GE Healthcare). Для обнаружения ECL-хемилюминесценции в блотах использовали систему ChemiDoc Imaging (Bio-Rad), а изображения анализировали с помощью программы QuantityOne (версия 4.6.7, BioRad). В каждом эксперименте на одну обработку использовали четыре чашки Петри. По крайней мере четыре повторения каждого эксперимента были выполнены на белок и время воздействия.

Статистический анализ

Т-критерий Стьюдента для непарных данных применяли с использованием программного обеспечения GraphPad Prism 6.01 (GraphPad Software, Сан-Диего, Калифорния, США). Различия p < 0,05 между экспериментальными группами считались статистически значимыми.

 

Полученные результаты

Пять из 25 пациентов, участвовавших в исследовании, не смогли завершить лечение: двое из них заболели COVID-19, один сменил место жительства и двое не посещали сеансы регулярно. Лечение не вызвало поддающихся обнаружению побочных эффектов ни у одного из пациентов на протяжении всего исследования, которое продолжалось 3 месяца после последнего сеанса лечения.

Результаты лечения пациентов с FPHL

Общее влияние на уплотнение волос: производная шкала Синклера.

На рис. 1 представлены репрезентативные изображения уплотнения волос в четырех областях, исследованных у пациента, до первого сеанса лечения и через три месяца после последнего сеанса. По производной шкале Синклера (Sinclair) отрицательные значения при сравнении трихоскопических изображений до и после лечения свидетельствуют об уплотнении волос. Соответствующие данные, представленные на рис. 2, показывают, что у всей выборки пациентов электротермическое воздействие вызывало значительное улучшение в виде уплотнения волос, как в областях, изначально диагностированных как пораженные DCD (лобные и межтеменные/височные), так и в тех, которые считались незатронутыми (не-DCD: затылочная и теменная).

Влияние на параметры, связанные с количеством и морфологией волос

Данные, обобщенные на рис. 3A, показывают, что терапия CRET вызывала значительное увеличение среднего количества и кумулятивной толщины волос во всех обработанных областях, как DCD, так и не DCD. Что касается параметров, связанных с морфологией волос, средняя толщина стержня была значительно уменьшена в областях DCD (лобных и височных), но не в областях без DCD. Значения, соответствующие остальным морфологическим параметрам: процентам тонких, средних и густых волос, отклонения по отношению к соответствующим средним значениям были высокими и не давали существенного ответа на обработку, поэтому они не показаны на рисунке.

Влияние на параметры, связанные с количеством и морфологией волосяных фолликулов

Данные, обобщенные на рис. 3B, показывают, что лечение вызывало значительное увеличение количества фолликулярных единиц, присутствующих в областях DCD. В этих областях было зарегистрировано значительное увеличение процентного содержания тройных фолликулярных единиц, сопровождающееся уменьшением одиночных и двойных фолликулярных единиц. Тот же эффект наблюдался в затылочной области без DCD, но не в макушке. Лечение не вызывало значительных изменений количества фолликулярных единиц ни в одной из двух областей без DCD.

Оценка индивидуальной реакции в четырех обработанных областях

Данные на рис. 4 показывают количество пациентов из общей выборки (n = 20), которые продемонстрировали благоприятный ответ в различных обработанных областях (значения после лечения более чем на 10 % по сравнению с соответствующими значениями до лечения) в четыре основных параметра уплотнения волос: среднее количество волос, кумулятивная толщина волос, количество фолликулярных единиц и количество тройных фолликулярных единиц. Что касается среднего количества волос, результаты показывают, что индивидуальный ответ на лечение был более выражен в лобной и височной областях DCD, в которых у 15 и 14 пациентов соответственно наблюдалось увеличение этого параметра более чем на 10%, в то время как в целом у пациентов с повышенным количеством волос было меньше в затылочной области (11 пациентов) и на макушке (6 пациентов). Также было больше пациентов с увеличением более чем на 10 % числа фолликулярных объединений в лобной и височной областях (10 и 8 соответственно), чем в затылочной области и темени (4 и 5 пациентов соответственно). Однако не было заметных различий между четырьмя обработанными областями по количеству пациентов с увеличением кумулятивной толщины волос (9-12 пациентов) и тройных фолликулярных объединений (10-15 пациентов).

В совокупности результаты анализа индивидуальных ответов показывают, что у большинства пациентов наблюдались благоприятные эффекты в нескольких областях лечения. Фактически, при повторном рассмотрении 4 выбранных параметров и поддержании критерия различия более чем на 10 % по сравнению со значениями до лечения было обнаружено, что у всех пациентов отмечалось некоторое улучшение одного или нескольких параметров по крайней мере в двух обработанных областях. , и до 15 из 20 пациентов показали некоторое улучшение в 4 областях (рис. 5).

Рисунок 1:  Уплотнение волос у пациента (пораженного DCD). Репрезентативные изображения. Слева направо: до первого сеанса: четыре области, изученные у пациента до первого сеанса (столбец 1), и репрезентативные трихоскопические изображения соответствующих областей (столбец 2). Через три месяца после последнего сеанса: четыре области у одного и того же пациента (столбец 3) и трихоскопические изображения тех же поверхностей, сфотографированные в столбце 2 (столбец 4).

Рисунок 2:  Оценка уплотнения волос по производной шкале Синклера. Значения представляют собой средние значения ± стандартная ошибка процента изменения между до и после лечения в четырех изученных областях. *: р<0,05; ***: p<0,001: Критерии Коэна и Вилкоксона с последующей поправкой Бонферрони для множественных тестов.

Рисунок 3:  Влияние на параметры, связанные с количеством и морфологией волос (3A) и волосяных фолликулов (3B). Значения представляют собой средние значения ± SE процентного изменения между до и после лечения в четырех изученных областях. *: р<0,05; **: р<0,01; ***: p<0,001: Критерии Коэна и Вилкоксона с последующей поправкой Бонферрони для множественных тестов.

 

Рисунок 4:  Количество пациентов (N), которые показали благоприятные эффекты (> 10% от значений до лечения) по одному или нескольким параметрам, рассматриваемым в 4 изученных областях, с алопецией и без алопеции.

Рисунок 5:  Количество пациентов (N), у которых наблюдалось некоторое улучшение (>10% по сравнению со значениями до лечения) по одному или нескольким выбранным параметрам. Все пациенты зафиксировали некоторое улучшение как минимум в двух обработанных областях.

 

Оценка индивидуальной реакции на лечение в зависимости от возраста

Данные на рис. 6 представляют для каждой из пациенток взаимосвязь между ее возрастом и общим количеством параметров, показавших благоприятный ответ на лечение в сумме по четырем исследованным направлениям. Между обеими переменными не было обнаружено статистически значимой корреляции.

Результаты опросов удовлетворенности

Анализ субъективных оценочных интервью показывает, что пациенты ощущают некоторое улучшение структуры волос и уменьшение их выпадения, начиная с конца пятого сеанса (середина лечения) и до трех месяцев после десятого (и последнего) сеанса лечения. Однако эти тенденции не являются статистически значимыми. Что касается качества волос, то между серединой и концом лечения наблюдается значительное улучшение, которое сохраняется в течение 3 месяцев после лечения. Наконец, что касается восприятия объема волос, со временем наблюдается значительное увеличение, достигающее максимальных значений через 3 месяца после последнего сеанса лечения (см. Таблицу 1).

	Средняя обработка	Завершить лечение	3М после лечения	Q Кокрановское p-значение
Мягкость	65%	55%	45%	0,513
Выпадение волос	65%	60%	60%	0,926
Качество	35%	70%	65%	0,020*
Объем	30%	45%	80%	0,001***

 

Таблица 1: Процент пациентов с положительным восприятием. (*: р<0,05; ***: р<0,001: критерий Коэна и Вилкоксона с последующей поправкой Бонферрони для нескольких тестов).

 

Влияние электрической стимуляции CRET на культуры клеток дермального сосочка

Влияние на пролиферацию клеток

Анализ XTT показал, что прерывистая электрическая стимуляция в течение 48 часов вызывала значительное увеличение, на 20 ± 7,6%, по сравнению с контрольной группой, подвергшейся ложному воздействию, пролиферации DPC (рис. 7). Этот пролиферативный ответ был подтвержден и усилен результатами иммунофлуоресцентного анализа с маркером пролиферации Ki67, которые показали статистически значимое увеличение (32 ± 8,5 %) по сравнению с контролем количества клеток Ki67+ в группе, подвергнутой электрическому воздействию (рис. 7).

Иммуноблот-анализ белков, участвующих в пролиферации ДПК: p-ERK, ERK и циклин D1

Прерывистая электрическая стимуляция в течение 12 часов вызывала значительное увеличение экспрессии p-ERK1/2 (на 51,5 ± 18,3 % по сравнению с контрольной группой, подвергшейся ложному воздействию). Никаких изменений не наблюдалось при более длительных сроках, когда лечение продолжалось в течение 24 или 48 часов (рис. 8). Что касается нефосфорилированной формы ERK1/2, то ее экспрессия не подвергалась существенному влиянию стимуляции ни в одном из протестированных интервалов. С другой стороны, на экспрессию циклина D1 значительно влияла электростимуляция с помощью CRET во всех изученных интервалах (рис. 9), при этом наблюдалась значительная сверхэкспрессия циклина в конце 12-часового и 24-часового интервалов лечения (23,05 ± 9,3 %). и на 10,3 ± 2,8 % выше соответствующего контроля соответственно) и субэкспрессии через 48 ч воздействия (на 11,5 ± 5,0 % ниже контроля).

 

Рисунок 6:  Корреляция между возрастом каждого пациента и общим количеством параметров, которые положительно отреагировали (> 10% по сравнению со значениями до лечения) на лечение в 4 изученных областях. Простая модель линейной регрессии.

Рисунок 7:  Анализы распространения. A. Анализы XTT и анализ иммунофлуоресценции для клеток Ki67+. Данные, нормализованные по контрольным группам, получавшим имитацию, представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего по меньшей мере для 3 повторов эксперимента. Обработанные образцы подвергались 48-часовому прерывистому воздействию CRET при 100 мкА/мм2. *: р<0,05; t-критерий Стьюдента. B. Репрезентативные изображения иммунофлуоресценции для Ki67. Зеленый: Ki67-положительные клетки, окрашенные антителом против Ki67 и Alexa Fluor® 488. Синий: ядра клеток, окрашенные DAPI. Масштабная линейка, 50 мкм. CRET: обработанный образец; C:  контрольная группа, подвергшаяся ложному воздействию.

Рисунок 8:  Иммуноблот для p-ERK1/2 и ERK1/2. А. Анализ экспрессии p-ERK1/2 и ERK1/2. Образцы обрабатывали CRET (прерывистое воздействие 4 часа) в течение 12, 24 или 48 часов. Данные, нормализованные по контрольным группам, получавшим ложную обработку, представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего отношения p-ERK1/2 к общему белку ERK1/2 по меньшей мере в 5 экспериментальных повторах за интервал обработки. *Р<0,05; t-критерий Стьюдента. B. Репрезентативные иммуноблоты с использованием GAPDH в качестве контроля загрузки.

 

Рисунок 9:  Иммуноблот для циклина D1. А. Анализ экспрессии циклина D1. Образцы обрабатывали CRET (прерывистое воздействие 4 часа) в течение 12, 24 или 48 часов. Данные, нормализованные по контрольным группам, получавшим ложную обработку, представляют собой среднее значение ± стандартная ошибка среднего для не менее 4 экспериментальных повторов за интервал обработки. *Р<0,05; t-критерий Стьюдента. B. Репрезентативные иммуноблоты с использованием GAPDH в качестве контроля загрузки.

 

Обсуждение

Хотя существует множество методов лечения с разной степенью эффективности при их применении для лечения DCD, из-за недостатков некоторых из них разработка новых методов лечения этого расстройства считается важной. В последнее время радиочастотная электротерапия, отдельно или в сочетании с лекарственными средствами, дала многообещающие результаты [21,22,24].

Доказано, что электротермическая терапевтическая технология CRET эффективна для регенерации мышц, костей, сухожилий и связок, а также кожи [16-19]. В настоящем исследовании мы проанализировали реакцию на CRET-терапию на частоте 448 кГц, применяемую при плотности тока j ≥100 мкА/мм ² , которая вызывает умеренную гипертермию в целевых зонах лечения, в группе добровольных пациентов с FPHL.

Анализ трихоскопических данных по полученной шкале Синклера выявил через три месяца после окончания лечения генерализованный и статистически значимый эффект уплотнения волос на четырех обработанных участках кожи головы, несмотря на то, что диагностика до лечения выявила дефицит плотности волос только в лобной и межтеменной областях. Это электротермически индуцированное повторное уплотнение может быть связано со значительным увеличением (приблизительно на 10-15 % по сравнению со значениями до обработки) среднего количества волос и совокупной толщины волос, зарегистрированных на четырех обработанных участках. Что касается морфологии волос, то в лобной и височной областях было зарегистрировано значительное уменьшение средней толщины стержня, диагностированное как недостаток плотности фолликулов в начале исследования, но не в двух оставшихся областях, с нормальной плотностью фолликулов по первоначальному диагнозу. Это подтверждает, что электротермическая обработка CRET оказывает стимулирующее действие на рост волос. На самом деле уменьшение толщины стержня волоса является типичной реакцией на процессы уплотнения волос, так как зарождающиеся волосы имеют уменьшенный диаметр, что приводит к уменьшению общего среднего диаметра за счет увеличения количества волос и фолликулярной плотности.

Уплотняющий эффект за счет образования новых фолликулярных объединений сопровождался увеличением количества фолликулярных объединений, которое было статистически значимым в зонах, характеризуемых как пораженные DCD, но не в зонах без DCD. Кроме того, трихоскопический анализ характеристик этих фолликулярных объединений выявил в лобной, височной и затылочной областях, но не в области макушки, значительное увеличение числа тройных фолликулярных единиц за счет соответствующего снижения числа одиночных и двойных фолликулярных единиц. Это указывает на потенциальную способность радиочастотной электротермической обработки увеличивать диаметр фолликулярных субъединиц, которые были миниатюризированы из-за FPHL, до диаметра менее 30 микрон, для которых они не обнаруживались цифровым трихоскопом в анализе до лечения.

В целом эти результаты совокупности эффектов, наблюдаемых в пуле из 20 пациентов, согласуются с результатами анализа индивидуального ответа каждого пациента, обобщенными на рис. 4. Фактически количество пациентов, у которых в конце исследование показало увеличение более чем на 10 % количества волос и фолликулярных объединений в лобной и затылочной областях, что было выше, чем у пациентов, у которых эти эффекты наблюдались в височной области и на макушке. Это может свидетельствовать о большей восприимчивости к электротермической обработке участков, пораженных DCD. С другой стороны, количество пациентов с увеличением кумулятивной толщины волос и частоты тройных фолликулярных единиц было одинаковым в четырех обработанных областях, что подтверждает, что также области с фолликулярной плотностью, считающейся нормальной в соответствии с диагнозом до лечения, могут реагировать на электротермическую стимуляцию. Фактически, комбинация данных об индивидуальной чувствительности (рис. 5) показывает, что у 19 из 20 пациентов наблюдались благоприятные эффекты в 3 или более обработанных областях по крайней мере по одному из четырех рассматриваемых параметров.

Однако анализ индивидуальных ответов также выявил заметные различия между пациентами по уровню ответа на лечение. Действительно, в то время как у некоторых пациентов наблюдались улучшения в нескольких параметрах уплотнения волос и в нескольких обработанных областях, у других пациентов наблюдались улучшения в меньшем количестве параметров и/или в меньшем количестве областей. Анализ записей и историй болезни пациенток не выявил достоверных связей между степенью их реакции на лечение и такими факторами, как возраст (рис. 6), особенности волосяного фолликула, особенности кожи головы, предшествующие беременности и предшествующие заболевания (данные не показаны).

Некоторые из результатов, описанных выше, совпадают с результатами нескольких исследований, в которых применялась радиочастотная электрическая терапия для лечения алопеции. В одном слепом исследовании, проведенном на выборке из 24 мужчин, применение неабляционных радиочастотных токов увеличило рост волос по сравнению с группой, не получавшей лечения [21]. Другое исследование с участием 19 мужчин с диагнозом андрогенная алопеция показало улучшение эффективности комбинированного лечения биполярными радиочастотными токами 1 МГц и миноксидилом по сравнению с лечением только миноксидилом [24]. В исследовании 25 пациенток с андрогенной алопецией лечение фракционными радиочастотными токами привело к улучшению количества и толщины волос, в основном в лобной области, без какого-либо заметного дискомфорта или побочных эффектов [22]. Хотя биологические и физиологические механизмы, участвующие в этих реакциях на RF, еще не определены, было высказано предположение, что воздействие RF может способствовать выработке факторов роста, таких как инсулиноподобный фактор роста 1 (ИФР-1), фактор роста эндотелия сосудов. (VEGF) или фактор роста гепатоцитов (HGF), участвующий в процессах роста волос [37]. Если это так, можно также предположить, что, по крайней мере, часть эффектов уплотнения, наблюдаемых в настоящем исследовании, может быть связана с увеличением производства таких факторов роста из-за стимулирования кровоснабжения, вызванного механическими и тепловыми стимулами, обеспечиваемыми лечением CRET. Фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) или фактор роста гепатоцитов (HGF), участвовали в процессах роста волос [37]. 

С другой стороны, увеличение количества фолликулярных единиц и волосяных фолликулов, наблюдаемое у пациентов, получавших CRET, может быть связано со стимуляцией роста волосяных фолликулов. Дермальный сосочек, расположенный в основании волосяного фолликула, был описан как ключевой сигнальный центр для контроля цикла роста волос, который начинается, когда фолликул в фазе телогена или покоя входит в фазу анагена или роста [38]. Клетки дермального сосочка представляют собой мезенхимальные клетки, которые взаимодействуют с различными типами эпителиальных клеток, с зародышевыми клетками волос или со стволовыми клетками волосяных фолликулов [28,39]. Фактически процесс активации роста волос начинается с пролиферации DPC и сопровождается пролиферацией стволовых клеток из выпуклости волосяного фолликула [22]. Поэтому, пролиферация DPC играет фундаментальную роль в росте волоси в регенерации и поддержки волосяных фолликулов [28,29].

Предыдущие исследования нашей группы показали, что экспозиция in vitro в субтермических условиях (j ≤ 150 мкА/мм ²) к электрической стимуляции синусоидальным сигналом CRET частотой 448 кГц способна стимулировать пролиферацию ряда типов клеток человека, включая стволовые клетки, фибробласты или кератиноциты [11,12,26]. Эти экспериментальные данные составляют основу гипотезы о том, что, по крайней мере, часть эффектов уплотнения, наблюдаемых в настоящем исследовании, может быть связана с увеличением пролиферации DPC, присутствующих в ранее существовавших или вновь сформированных фолликулах пациентов, получавших CRET. Такой пролиферативный эффект, если он возникнет, будет вызван радиочастотным электрическим стимулом в отсутствие теплового и механического компонентов лечения CRET. Поэтому для проверки этой гипотезы культуры DPC от женщин подвергались воздействию параметров электрического сигнала, эквивалентных тем, которые использовались при лечении CRET, применяемом к женщинам с диагнозом DCD, которые участвовали в медицинском исследовании. Плотность тока 100 мкА/мм² , вызывающий термические эффекты при воздействии на пациентов, не вызывал заметного термического повышения (ΔT < 0,1 ^o C) в культурах DPC из-за низкого электрического сопротивления питательной среды прохождению тока [36].

Полученные результаты показывают, что 48-часовое прерывистое воздействие электрического сигнала в субтермических или нормотермических условиях способствует пролиферации DPC. Эти данные подтверждают выдвинутую гипотезу и свидетельствуют о том, что, по крайней мере, часть эффектов роста и уплотнения волос, наблюдаемых у пациентов, подвергшихся электротермическому и механическому воздействию с помощью CRET, могла быть опосредована ранней стимуляцией, исключительно электрической природы, пролиферации DPC присутствуют в волосяных фолликулах этих пациентов.

Чтобы исследовать природу этого электроиндуцированного пролиферативного ответа, была проанализирована экспрессия трех белков, участвующих в клеточной пролиферации: Ki67, циклина D1 и митоген-активируемой киназы ERK в ее активном (p-ERK1/2) и неактивном состоянии. (p-ERK1/2). Белок Ki67 является отличным маркером пролиферирующих клеток, поскольку он экспрессируется во время активных фаз клеточного цикла (G1, S, G2 и митоз), но не во время фазы покоя (G0) [40]. Со своей стороны, циклин D1 экспрессируется во время фазы G1 и участвует в инициации прогрессирования клеточного цикла DPC [41]. Что касается пути MAPK/ERK, его активация имеет решающее значение для пролиферации различных типов клеток, включая клетки дермального сосочка, и было описано, что несколько активаторов роста волос, таких как эндотелиальный фактор роста (EGF), или аденозин, оказывают свое действие через путь MARK/ERK [42,43].

Полученные экспериментальные результаты показывают, что по сравнению с соответствующими контрольными группами, подвергшимися ложной обработке, субтермическая радиочастотная электростимуляция с помощью CRET вызывает значительное увеличение экспрессии Ki67, наблюдаемое через 48 часов воздействия, а также экспрессию циклина D1 через 12 и 24 ч, а при фосфорилировании ERK1/2 через 12 ч. Можно предположить, что стимуляция экспрессии циклина D1 и форфорилирования ERK1/2 участвуют в пролиферативном ответе, выявляемом с помощью анализа XTT и мечения Ki67 после 48 ч воздействия. Тот факт, что после 12 ч или 24 ч воздействия не было обнаружено значительных изменений в экспрессии ERK1/2 или циклина D1 соответственно, указывает на то, что пролиферативный эффект, индуцированный CRET, будет иметь место посредством ранней регуляции экспрессии циклина D1, и активации пути MAPK/ERK1/2. Эти результаты, которые согласуются с другими ранее полученными нашей группой данными, свидетельствующими о том, что активация ERK1/2 также участвует в пролиферации кератиноцитов, фибробластов и стволовых клеток человека, индуцированной субтермической электростимуляцией на частоте 448 кГц, дополняют совокупность экспериментальных данных, свидетельствующих о том, что Радиочастотное воздействие может стимулировать рост волос [11,12]. Так, сообщалось, что субтермическое воздействие электромагнитных полей частотой 1,763 МГц может стимулировать экспрессию Ki67 в кератиноцитах матрикса и увеличивать удлинение стержня волоса в культуре волосяных органов ex vivo [44], или что обработка токами от 1 до 2 МГц увеличивает пролиферацию и экспрессию Wnt/b-катенина, Ki67, p-ERK и p-AKT в DPC [45]. 

В совокупности эти данные подтверждают гипотезу о том, что сама по себе электрическая стимуляция вносит значительный вклад в эффект восстановления плотности волос при электротермической обработке CRET. Эффект электрического стимула будет проявляться посредством ранней индукции сверхэкспрессии или активации белков, непосредственно участвующих в контроле клеточного цикла DPC, присутствующих в волосяных фолликулах пациентов с DCD. Аналогичные эффекты ранней гиперэкспрессии белков клеточного цикла были зарегистрированы в фибробластах и ​​кератиноцитах человека, обработанных субтермической электростимуляцией CRET на частоте 448 кГц [12]. Имеются экспериментальные данные, указывающие на то, что клеточный ответ на электрический стимул CRET будет нелинейно зависеть от частоты сигнала [46].

Короче говоря, результаты исследования показывают, что через три месяца после окончания электротермического лечения КРЭТ у пациентов в целом наблюдалось значительное увеличение плотности волос, что было выявлено при анализе трихоскопических данных по производной шкале Синклера. Этот эффект обусловлен значительными изменениями, зарегистрированными в различных параметрах, участвующих в регенерации волос, включая увеличение среднего количества волос и количества фолликулярных единиц. Такие изменения выявлялись как в зонах с дефицитом капиллярной плотности по предпроцедурной диагностике, так и в тех, чья фолликулярная плотность считалась нормальной. Поскольку основным механизмом, лежащим в основе патологического выпадения волос, является нарушение регуляции пролиферации клеток дермального сосочка, пролиферативная реакция DPC на субтермический электрический раздражитель может быть сильно вовлечена в некоторые из эффектов повторного уплотнения, наблюдаемых в трихологическом исследовании. Таким образом, электрическая стимуляция может способствовать росту волос и пролиферации фолликулов, а также индуцировать появление и сохранение волосяных фолликулов в анагене. Этот электроиндуцированный эффект может быть добавлен к эффектам термических и механических стимулов лечения CRET, чей потенциальный вклад в наблюдаемое восстановление плотности волос еще недостаточно охарактеризован или определен количественно.

В целом, результаты трихологического исследования у женщин с DCD и экспериментального исследования у женщин с DPC согласуются друг с другом и указывают на то, что лечение RF CRET на частоте 448 кГц может быть эффективным как при терапии уплотнения волос, так и при лечении, профилактики выпадения волос. Эти данные должны быть дополнены экспериментальными исследованиями и медицинскими испытаниями, двойными слепыми и с соответствующими контролями, которые изучают эффекты применения CRET в сочетании с другими химическими или физическими методами лечения DCD и позволяют выявить факторы, влияющие на индивидуальную реакцию больных на электротермическое лечение.

Благодарности

Авторы выражают благодарность д-ру Алехандро Убеда Маесо за его существенный вклад в анализ и интерпретацию медицинских и экспериментальных результатов, а также в написание рукописи; д-ру Лауре Веласкес Архона, медицинскому директору больницы Витас Мадрид Аравака, за ее работу по координации медицинского персонала и пациентов для этого исследования; д-ру Кристине Перейра душ Сантуш за ее экспертную помощь в статистическом анализе медицинских результатов; мисс Акире Рубио Наварро и мисс Мириам Руис Морено за их техническую поддержку в лечении пациентов и г-ну Хуберту Лацки из TrichoLAB за его работу по координации трихоскопического анализа. Авторы сообщают, что нет конкурирующих интересов, о которых можно было бы заявить.

Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

Источники

1. Ребора А., Гуаррера М. Телоптоз и кеноген: две новые концепции в трихологии человека. Арка Дерматология. 2004;140(5):619-20.
2. Гуаррера М., Ребора А. Кеноген при женской андрогенетической алопеции. Дерматол. 2005;210(1):18-20.
3. Afifi L, Maranda EL, Zarei M, Delcanto GM, Falto-Aizpurua L, Kluijfhout WP, et al. Низкоинтенсивная лазеротерапия как метод лечения андрогенетической алопеции. Лазерная хирургия Мед. 2017;49(1):27-39.
4. Нестор М.С., Аблон Г., Гаде А., Хан Х., Фишер Д.Л. Варианты лечения андрогенетической алопеции: эффективность, побочные эффекты, соблюдение требований, финансовые соображения и этика. J Косметический Дерматол. 2021;20(12):3759-81.
5. Зито П.М., Бистас К.Г., Сайед К. в StatPearls (StatPearls Publishing, 2022). [Последний доступ 13 июня 2022 г.] http://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK513329/
6. Ваньо-Гальван С., Камачо Ф. Новедадес терапевтикас в трикологии. Actas Dermo-Sifiliográficas. 2017;108:221-8.
7. Аврам М.Р., Леонард-младший Р.Т., Эпштейн Э.С., Уильямс Д.Л., Бауман А.Дж. Текущая роль лазера/источников света в лечении выпадения волос по мужскому и женскому типу. J Косметическая лазерная терапия. 2007;9(1):27-8.
8. Яо Г., Цзян Д., Ли Дж., Кан Л., Чен С., Лонг И. и др. Самоактивируемая электрическая стимуляция для эффективной регенерации волос с помощью носимого всенаправленного генератора импульсов. АКС Нано. 2019;13(11):12345-56.
9. Dabek RJ, Roh DS, Ozdemir D, Austen Jr WG, Bojovic B. Фракционное лазерное отрастание волос и микронидлинг для лечения очаговой алопеции: обзор. Куреус. 2019.
10. Bonjorno AR, Gomes TB, Pereira MC, de Carvalho CM, Gabardo MC, Kaizer MR, et al. Радиочастотная терапия в эстетической дерматологии: обзор клинических данных. J Cosmet Dermatol, 2020;19(2):278-81.
11. Hernández-Bule ML, Paíno CL, Trillo MÁ, Úbeda A. Электрическая стимуляция на частоте 448 кГц способствует пролиферации мезенхимальных стволовых клеток человека. Cell Physiol Biochem. 2014;34(5):1741-55.
12. Эрнандес-Буле М.Л., Толедано-Масиас Э., Наранхо А., де Андрес-Самора М., Убеда А. Стимуляция in vitro радиочастотными токами способствует пролиферации и миграции кератиноцитов и фибробластов человека. Электромагнитная биомед. 2021;40(3):338-52.
13. Мейер П.Ф., де Оливейра П., Силва Ф.К., да Коста А., Перейра Ч.Р., Касенаве С. и др. Радиочастотная терапия индуцирует экспрессию фактора роста фибробластов 2 и впоследствии способствует неоколлагенезу и неоангиогенезу в тканях кожи. Лазеры Med Sci. 2017;32(8):1727-36.
14. Садик Н., Ротхаус К.О. Эстетические применения радиочастотных устройств. Clin Plastic Surg. 2016;43(3):557-65.
15. Oliveira Paggiaro A, Pinheiro R, Soares K, Fernandes Carvalho V, Gemperli R. Оценка уровня доказательности использования радиочастоты в эстетическом лечении: систематический обзор и метаанализ. J Космет Дерматол. 2021;20(9):2691-702.
16. Такахаши К., Суяма Т., Онодера М., Хирабаяши С., Цузуки Н., Чжун-Ши Л. Клинические эффекты емкостной электропереносной гипертермической терапии при люмбаго. J Phys Ther Sci. 1999;11(1):45-51.
17. Кумаран Б., Уотсон Т. Лечение с использованием емкостной резистивной монополярной радиочастоты 448 кГц улучшает боль и улучшает функцию у пациентов с остеоартритом коленного сустава: рандомизированное контролируемое исследование. Физиотерапия. 2019;105(1):98-107.
18. Бито Т., Таширо Ю., Судзуки Ю., Кадзивара Ю., Зейдан Х., Кавагоэ М., Сонода Т., Накаяма Ю., Йокота Ю., Шимура К., Тацуми М. Острые эффекты емкостной и резистивной электрической передачи (CRet) на ахиллово сухожилие. Электромагнитная биомед. 2019;38(1):48-54
19. Наранхо П., Лопес-Эстебаранц Дж., Шоаиб Т., Пинто Х. Экспериментальное исследование неабляционной емкостной резистивной радиочастоты 448 кГц для уменьшения морщин. Эстетическая Мед. 2020;6:41-8.
20. Пинто ДР. Радиочастота монополярная емкостная/резистивная 0,5 МГц на коже лица. Медицина Эстетика. 2009;20:32-7.
21. Tan Y, Wei L, Zhang Y, Goren A, McCoy J, Stanimirovic A, et al. Неабляционная радиочастота для лечения андрогенетической алопеции. Acta Dermatovenerol Alp Pannonica Adriat. 2019;28(4):169-71.
22. Вернер И. Клиническая оценка нового устройства на основе фракционной радиочастоты для стимуляции роста волос. Глоб Дерматол. 2017;4.
23. Вернер И., Лотти Т. Клиническая оценка нового фракционного радиочастотного устройства для роста волос: фракционная радиочастота для стимуляции роста волос. Дерматологическая терапия. 2018;31(3):e12590.
24. Yu AJ, Luo YJ, Xu XG, Bao LL, Tian T, Li ZX и др. Пилотное исследование комбинированного фракционного радиочастотного микронидлинга и 5% местного миноксидила при лечении облысения по мужскому типу на разделенной коже головы. Клин Эксп Дерматол. 2018;43(7):775-81.
25. Эрнандес-Буле М.Л., Трилло М.А., Мартинес-Гарсия М.А., Абилахуд С., Убеда А. Хондрогенная дифференцировка стволовых клеток жировой ткани с помощью радиочастотной электрической стимуляции. J Stem Cell Res Ther. 2017;7(407):2.
26. Трилло М.А., Мартинес М.А., Убеда А. Влияние модуляции сигнала на реакцию фибробластов человека на стимуляцию in vitro субтепловыми радиочастотными токами. Электромагнитная биомед. 2021;40(1):201-9.
27. Эрнандес-Буле М.Л., Мартинес-Ботас Дж., Трилло М.А., Пайно С.Л., Убеда А. Антиадипогенные эффекты субтермической электрической стимуляции на частоте 448 кГц на дифференцирующиеся мезенхимальные стволовые клетки человека. Molecular Med Rep. 2016;13(5):3895-903.
28. Стенн К.С., Паус Р. Контроль цикла волосяных фолликулов. Физиологическая редакция 2001 г.
29. Kwack MH, Kang BM, Kim MK, Kim JC, Sung YK. Миноксидил активирует путь β-катенина в клетках дермального сосочка человека: возможное объяснение его эффекта пролонгации анагена. J Дерматологические науки. 2011;62(3):154-9.
30. Фитцпатрик ТБ. Солей и пау. J Мед Эстет. 1975;2;33-4.
31. Людвиг Э. Классификация типов андрогенетической алопеции (обычного облысения), встречающихся у женского пола. Бр Дж Дерматол. 1977 год; 97:247-54.
32. Таширо Ю., Хасэгава С., Йокота Ю., Нисигучи С., Фукутани Н., Широка Х. и др. Влияние емкостного и резистивного электрического переноса на насыщение гемоглобина и температуру тканей. Int J Гипертермия. 2017;33(6):696-702.
33. Ley Organica 15/1999 de Protección de Datos de Carácter Personal. [Последний доступ 14 июня 2022 г.] https://www.boe.es/eli/es/lo/1999/12/13/15/con
34. Reglamento (UE) 2016/679 del Parlamento Europeo y del Consejo de 27 de abril de 2016, relativo a la protección de las personas físicas en materia de tratamiento de datos personales y la libre circulación de estos datos. [Последний доступ 14 июня 2022 г.] https://eur-lex.europa.eu/legal-content/ES/TXT/?uri=celex%3A32016R0679
35. Синклер Р., Джолли Д., Маллари Р., Маги Дж. Надежность горизонтально срезанных биопсий кожи головы при диагностике хронического диффузного телогенового облысения у женщин. J Am Acad Дерматол. 2004;51(2):189-99.
36. Эрнандес-Буле М.Л., Трилло М.А., Сид М.А., Леал Дж., Убеда А. Воздействие электрического тока частотой 0,57 МГц in vitro оказывает цитостатическое действие на клетки гепатокарциномы человека HepG2. Международная онкология. 2007;30(3):583-92.
37. Юн Дж.С., Ку В.И., Ли Дж.Х., Ан Х.К. Светотерапия низкого уровня с использованием устройства типа шлема для лечения андрогенетической алопеции: 16-недельное, многоцентровое, рандомизированное, двойное слепое, ложное контролируемое исследование. Мед. 2020;99(29).
38. Донг Л., Хао Х., Ся Л., Лю Дж., Ти Д., Тонг С. и др. Обработка МСК средой, кондиционированной Wnt1a, активирует клетки DP и способствует возобновлению роста волосяных фолликулов. Научный отчет 2014;4(1):1-9.
39. Греко В., Чен Т., Рендл М., Шобер М., Пасолли Х.А., Стоукс Н. и др. Двухэтапный механизм активации стволовых клеток при регенерации волос. Клеточная стволовая клетка. 2009;4(2):155-69.
40. Scholzen T, Gerdes J. Белок Ki-67: от известного и неизвестного. J Клеточная физиол. 2000;182(3):311-22.
41. Ryu S, Lee Y, Hyun MY, Choi SY, Jeong KH, Park YM и др. Микофенолат противодействует индуцированным IFN-γ катагеноподобным изменениям посредством активации β-катенина в клетках дермального сосочка человека и волосяных фолликулах. Int J Molecular Sci. 2014;15(9):16800-15.
42. Квон О.С., Хан Дж.Х., Ю Х.Г., Чунг Дж.Х., Чо К.Х., Ын Х.К. и др. Усиление роста человеческих волос in vitro с помощью эпигаллокатехин-3-галлата зеленого чая (EGCG). Фитомедицина. 2007;14(7-8):551-5.
43. Дастан М., Наджафзаде Н., Абеделахи А., Сарви М., Ниапур А. Лизат тромбоцитов человека по сравнению с миноксидилом стимулирует рост волос, активируя анаген, стимулирующий сигнальные пути. Биомед Фармаколог. 2016;84:979-86.
44. Yoon SY, Kim KT, Jo SJ, Cho AR, Jeon SI, Choi HD и др. Индукция роста волос инсулиноподобным фактором роста-1 в клетках волосяных фолликулов, облученных радиочастотой 1763 МГц. ПЛОС Один. 2011;6(12):e28474.
45. Sohn KM, Jeong KH, Kim JE, Park YM, Kang H. Эффекты стимулирования роста волос при различных настройках параметров переменного тока опосредованы активацией пути Wnt/β-catenin и MAPK. Экспериментальный дерматол. 2015;24(12):958-63.
46. Эрнандес-Буле М.Л., Медель Э., Коластра С., Ролдан Р., Убеда А. Реакция клеток нейробластомы на радиочастотные токи в зависимости от частоты сигнала. БМК Рак. 2019;19(1):1-4.